Western blotting (Transfer)
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Introduction
Western blotting의 Transfer는 Gel에서 분리된 단백질을 전기적 힘을 가하여 Membrane으로 이동하는 과정입니다. 이른바 전기영동 Gel의 사본을 작성하는 느낌입니다. 과정 자체는 간단한 것이지만, Gel에서 Membrane으로 이동할 때 Gel과 Membrane이 밀착되지 않아서 공기가 들어가면 일부 Transfer가 안되거나, 여러 조건으로 인해 효율이 떨어질 수 있습니다. 숙련된 연구자도 만족할만한 Transfer 결과를 얻는 것은 꽤 어렵다고 합니다.
ATTO의 제품을 사용한 Semi-dry 방식의 Western blotting에 대해 소개합니다.
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Work flow
PAGE 전기영동 장치는 목적이나 샘플에 따라서 “Gel size”, “Sample comb (검체 수)” 등 조건에 맞춰 선택합니다. 냉각시스템이나 항온화가 필요한 경우는 온도 조절이 가능한 사양의 장치를 선택합니다.
- Compact PAGE (6×6 cm gel): 검체(시료)수가 적은 경우, 시간과 시약의 절약. 최단 전기영동 시간 10분
- Mini PAGE (9×8 cm gel): 표준사이즈, 다양한 특성에 따른 전기영동 탱크 및 다양한 Sample comb
- Wide PAGE (14×8 cm gel): 많은 검체를 한 번에 전기영동 가능, Gel 2장으로 최대 60 sample 검출 가능
- Slab PAGE (13×13 cm gel): 큰 사이즈의 PAGE 전기영동이 필요한 경우
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ATTO PAGE Line-up
Compact (6×6 cm gel) size
| WSE-1010 cPAGE Ace | WSE-1025 cPAGE Ace Twin | |
|---|---|---|
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| Application | 핵산, 단백질, polypeptide 등의 전기영동 | |
| Gel size | 60 mm (W) x 60 mm (L), thickness: 0.75 mm | |
| Plate size | 76 mm (W) x 70 mm (L) | |
| Buffer volume | 170 mL (Lower 125 mL, Upper 45 mL) / 1 gel | |
| Number of gels | 1 gel | 1 or 2 gels |
| Sample comb | 12-well Smiling-less comb | |
| Power supply | 전원일체형 (Low/Standard/High 모드) | |
| Precast gel | c-PAGEL / c-PAGEL HR / cp-PAGEL | |
Mini (9×8 cm gel) size
| WSE-1150 PageRunAce | AE-6530 mPAGE | WSE-1165 Mini-Slab | |
|---|---|---|---|
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| Application | 핵산, 단백질, polypeptide 등의 전기영동 | ||
| Gel size | 90 mm (W) x 80~83 mm (L), thickness: 1 mm | ||
| Plate size | 120 mm (W) x 102 mm (L) | 100~120 mm (W) x max. 102 mm (L) | |
| Buffer volume | Upper 80 mL, Lower 420 mL | Total 400~650 mL | |
| Gel 항온 방식 | 상하 Buffer의 양면 항온 고속, 고해상도 전기영동 대응 |
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| Number of gels | Max. 2 gels | ||
| Sample comb | 12-well Smiling-less comb | ||
| Power supply | 전원일체형 (Low/Standard/High 모드) | 별도 | |
| Precast gel | e-PAGEL / e-PAGEL HR / PAGEL / p-PAGEL | ||
Wide (14×8 cm gel), Slab (13×13 cm gel) size
| WSE-1170 Multi Lane Gel Chamber | AE-6220 Dual Slab Chamber | |
|---|---|---|
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| Application | 핵산, 단백질, polypeptide 등의 전기영동 | |
| Gel size | 140 mm (W) x 80 mm (L), thickness: 1 mm | 138 mm (W) x 130 mm (L), thickness: 1 mm or 2 mm |
| Plate size | 160 mm (W) x 100 m (L) | 160 mm (W) x 160 mm (L) |
| Buffer volume | max. 900 mL | max. 930 mL |
| Gel 항온 방식 | 상하 Buffer의 양면 항온 고속, 고해상도 전기영동 대응 | 상부 Buffer의 한쪽 면 항온 |
| Number of gels | max. 2 gels | max. 2 gels |
| Sample comb | 30-well Smiling-less comb | 12-well Smiling-less comb |
| Power supply | 별도 | |
| Precast gel | m-PAGEL | - |
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Power supply의 선택
전기영동 장치를 사용하기 위해서는 Power supply (전원장치)가 필요합니다. 장치(Gel) 크기가 커짐엥 따라서 필요한 전압의 용량이 커지므로 참고하십시오.
또한 PAGE 전기영동은 전압(V)의 사양, Agarose 전기영동 또는 Blotting은 전류(A)의 사양이 중요하므로 그에 맞는 사양을 확인하시기 바랍니다.
(〇: 적용, △: 조건에 따라서 적용, ×: 적용 어려움)
| WSE-3100 PowerStation Ghibli I | WSE-3200 PowerStation III | WSE-3500 PowerStation HC | WSE-3400 myPower H300 | AE-8155 myPower II 500 | |
|---|---|---|---|---|---|
 |  |  |  |  |
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| Compact/Mini size PAGE | 〇 | 〇 | △ | 〇 | 〇 |
| Slab size PAGE | 〇 | 〇 | × | 〇 | 〇 |
| Cooling PAGE | 〇 | 〇 | × | × | △ |
| Sequence gel | × | △ | × | × | × |
| Disc IEF | 〇 | 〇 | × | △ | △ |
| Plate IEF | △ | △ | × | × | × |
| Submerge agarose | 〇 | 〇 | △ | 〇 | △ |
| Semi-dry blotting | 〇 | △ | 〇 | 〇 | △ |
| High speed Semi-dry blotting | 〇 | △ | 〇 | △ | × |
| Wet blotting | 〇 | × | 〇 | × | × |
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