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How to choose the reagents for semi-dry blotting

  1. 개요

ATTO에는 목적에 맞는 다양한 semi-dry blotting 시약이 있습니다. 각 제품의 특징을 소개합니다.

 Transfer packSemi-dry transfer bufferWet transfer buffer
WSE-4057 QBlot kit MWSE-7210 EzFastBlot HMWAE-1465 EzFastBlotAE-1460 EzBlotWSE-7055 EzRun TG
편리성★★★★★★★★☆☆★★★☆☆★★☆☆☆★★☆☆☆
Transfer 시간★★★★★★★☆☆☆★★★★★★★☆☆☆★☆☆☆☆
Transfer 효율★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
고분자 Transfer★★★★☆★★★★★★★☆☆☆★★★☆☆★★★★★
Transfer 범위~ 250 kDa~ 600 kDa저분자 ~ 200 kDaPeptide ~ 250 kDa저분자 ~ 200 kDa
최소 Transfer 소요시간5min30min10min30min60min

쉽다! 빠르다! ATTO의 Transfer pack – QBlot kit series

QBlot kit series는 semi-dry transfer buffer에 PVDF membrane과 pad (filter paper)가 함께 구성된 transfer pack입니다. 1회분의 pack을 열어서 전기영동 후의 gel을 올리면 바로 blotting이 가능합니다. 일반적으로 Western blotting의 filter paper나 membrane은 equilibrium 과정이 필수입니다. QBlot kit series는 번거로운 equilibrium 과정이 필요없으며, 개봉 즉시 바로 사용이 가능합니다. 전용 transfer buffer를 사용하여 transfer 효율도 높고, 단시간에 고효율 western blotting이 가능합니다. 또한 전용 pad (filter paper)를 사용하고 있기 때문에 얼룩이나 bubble 등으로 인한 실수를 줄이고, 누구나 쉽게 사용이 가능합니다.

참고 데이터

위 사진은 2.2 ng/lane 샘플을 2/3 serial dilution한 Human plasma 단백질을 전기영동하고 WSE-4057 QBlot kit MAE-1465 EzFastBlot (+PVDF membrane, Absorbent paper)를 사용하여 Western blotting한 결과를 보여줍니다. Transfer한 blotting membrane을 1/10,000 dilution한 Human albumin antibody와 반응시켜 WSE-7210 EzWestLumi plus로 밴드를 검출하였습니다.
QBlot kit series는 AE-1465 EzFastBlot에 소요되는 것보다 시간을 1/2로 단축했을 때에도 유사한 감도를 나타내었으며, 동일한 시간에서는 더욱 고감도로 검출되어 트랜스퍼 효율이 매우 상승했음을 알 수 있습니다.

고분자 단백질을 빠르게! – WSE-7210 EzFastBlot HMW

WSE-7210 EzFastBlot HMW는 200 kDa 이상의 고분자 단백질도 고속으로 트랜스퍼할 수 있는 Semi-dry transfer buffer입니다. 사용이 쉬운 1액계로 methanol을 사용하지 않기 때문에 폐액처리가 간편합니다.

 

참고 데이터

EzFastBlot HMW data

위 사진은 WSE-7210 EzFastBlot HMW와 Hand-made transfer buffer (100 mM Tris, 192 mM Glycine, 10% MeOH)를 이용하여 blotting한 후에 blotting membrane을 염색한 결과입니다.
Hand-made buffer에 비해 WSE-7210 EzFastBlot HMW에서는 240 kDa 이상의 고분자 단백질도 선명하게 트랜스퍼된 것을 확인할 수 있습니다. 이처럼 Semi-dry blotting에서도 Wet transfer와 동등하거나 그 이상의 트랜스퍼 효율의 결과를 얻을 수 있습니다.

빠르게! 높은 가성비의 고속 transfer buffer – AE-1465 EzFastBlot

AE-1465 EzFastBlot은 Semi-dry blotting 시간을 대폭 단축시킬 수 있는 고속 transfer buffer입니다.
사용이 간편한 1액계로 methanol을 사용하지 않아서 폐액처리가 번거롭지 않습니다.

참고 데이터

위 사진은 Human plasma 단백질을 125 ng/lane 부터 1/2 serial dilution하여 전기영동한 후, AE-1465 EzFastBlot과 Hand-made buffer (100 mM Tris, 192 mM Glycine, 10% MeOH)를 사용하여 Western blotting을 실시한 결과입니다.
Transfer한 blotting membrane을 1/4,000 희석한 Human transferrin antibody 및 1/10,000 희석한 HRP-labeled secondary antibody와 반응하여 WSE-7120 EzWestLumi plus로 밴드를 검출하였습니다.
AE-1465 EzFastBlot은 Hand-made buffer에 비해, 단시간에 고효율의 transfer가 가능한 것을 확인할 수 있었습니다.

더 높은 효율을 원한다면! – AE-1460 EzBlot

AE-1460 EzBlot은 3액계의 transfer buffer로 효율적인 transfer가 가능한 transfer buffer입니다. 저분자에서 고분자에 이르기까지 효율적인 transfer가 가능합니다.
불연속계 buffer 조성으로 일반적으로 전사되기 어려운 염기성 단백질과 복합단백질도 효율적으로 transfer할 수 있습니다.

참고 데이터

위 사진은 molecular weight marker와 단백질을 전기영동하고 AE-1460 EzBlot을 이용하여 Semi-dry blotting한 blotting membrane과 Wet transfer한 blotting membrane을 염색한 결과입니다. 빨간색과 파란색 네모로 표시된 부분의 WSE-7020 EzProtein Ladder를 보면 저분자에서 고분자까지 모든 밴드가 빠짐없이 transfer됨을 알 수 있습니다. 이처럼 Semi-dry 방식에서도 Wet 방식과 동등한 전사 효율의 결과를 얻을 수 있습니다.

  2. Semi-dry blotting

comparison of wet transfer and semi-dry transfer

Western blotting은 전기영동을 분리된 gel 단백질을 membrane으로 옮겨서 검출하는 실험 방법입니다. Western blotting에는 크게 Semi-dry 방식과 Wet 방식이 있습니다.
Semi-dry blotting은 평평한 전극판에 blotting buffer를 적신 filter paper, membrane, gel을 쌓아서 밀착시켜 전기를 흘려줌으로 gel에 있는 샘플을 membrane으로 이동시키는 방법입니다.
Semi-dry 방식은 blotting buffer를 filter paper에 적시기만 하면 되므로 Wet 방식에 비해 용액의 샤용량이 적습니다. 또한 과전류나 발열의 우려도 적기 때문에 냉각 장치 등이 필요없습니다.

transfer efficiency according to transfer buffers

다양한 ATTO의 transfer buffer를 이용하여 blotting한 후, blotting membrane과 gel을 AE-1340 EzStain AQua (CBB)로 염색한 결과입니다. WSE-7055 EzRun TG (기존 Towbin method)보다 AE-1460 EzBlot, AE-1465 EzFastBlot, WSE-7210 EzFastBlot HMW는 semi-dry 방식에서도 고효율로 단백질을 트랜스퍼할 수 있습니다.
AE-1465 EzFastBlot은 약 10분의 단시간에 200 kDa까지의 단백질을 트랜스퍼 하는 데 적합하며, WSE-7210 EzFastBlot HMW는 200 kDa 이상의 고분자 단백질도 30분 만에 Wet 방식보다 높을 효율로 트랜스퍼가 가능합니다. AE-1460 EzBlot은 단백질 밴드를 더욱 선명하게 트랜스퍼하는 데 적합합니다.

  3. 실험 과정

Transfer setting workflow

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