Principle and workflow of Semi-dry blotting

MSDS

1. Blotting (Transfer)

전기영동으로 분리된 성분을 membrane 위로 옮겨서 검출하는 “Blotting method”

Blotting은 목적하는 성분을 특이적으로 고감도로 검출하기 때문에 단백질, DNA, RNA의 기본적인 연구 방법으로써 넓게 이용되고 있습니다. Blotting법은 DNA를 membrane으로 옮기는 방법이 Southern Blotting, 단백질을 membrane으로 옮기는 것을 Western Blotting이라고 합니다.

2. 실험 원리

Semi-dry blotting이란 평평한 전극판에 blotting solution을 적신 filter paper, 전기영동 후의 gel, membrane을 쌓아서 밀착시켜 전기를 흘려 gel에 있는 시료를 membrane 위로 이동시키는 것입니다. Semi-dry blotting은 blotting solution을 filter paer에 적시기만 하므로 소량의 용액으로 충분히 가능합니다. 또한 과전류나 발열의 우려도 적기 때문에 냉각 장치나 전용 전원도 필요없습니다. 또한 3종류의 blotting solution을 이용하여 blotting 효율을 높이고, fast-transfer가 가능한 blotting solution으로 통전 시간을 단축할 수 있습니다.

Semi-dry blotting에서 Tris-Glycine-Methanol 1액계 용액을 사용하여 실시하는 방법이 있는데, 이는 Wet blotting (Tank식, Towbin method) 방법에 유래한 것으로 Semi-dry 방식에는 적합하지 않습니다.
Semi-dry blotting의 방법*에 의거한 3액계 blotting buffer의 사용을 권장합니다. 3종류 (A,B,C 용액)의 blotting buffer는 ATTO의 AE-1460 EzBlot 제품이 있습니다.

* Kyhse-Anderson, J. (1984) J. Biochem. Biophys. Methods10, 203-209 [PubMed]

최근 “Fast transfer”의 이용이 증가하고 있습니다. 다만, blotting solution의 조성, 통전 조건 등 fast transfer에 최적화된 조건이 있으므로 주의해주십시오.
ATTO에서는 AE-1465 EzFastBlot, WSE-7210 EzFastBlot HMW가 가장 많이 판매되고 있습니다.
Semi-dry blotting에서는 “Filter paper”가 blotting solution을 흡수하여 용액을 머금고 있어 중요한 역할을 합니다. Filter paer의 두께나 매수를 잘 지켜주십시오.

결과가 좋지 않을 경우에는 1. 시료 조제, 2. 전기영동, 3. blotting, 4. detection (Blocking~Ab reaction~detection)의 4가지 과정으로 나누어 원인을 생각해 볼 수 있습니다.
예를 들어, prestained marker를 동시에 전기영동 및 blotting한 경우, marker는 문제가 없이 transfer되었다면 시료(용액)나 detection 과정에 요인이 있을 수 있다고 추측할 수 있습니다.